流感疫苗诱导怎样的B细胞应答？HA探针提供细胞层面的答案

Tursi等人通过优化N/P比开发了高免疫原性的新型核酸疫苗（DNA-LNP）平台，并对其先天免疫激活机制和适应性免疫应答进行研究。结果发现DNA-LNP通过cGAS-STING-TBK1通路激活先天免疫，募集CD103⁺迁移性树突状细胞强效诱导CD8⁺ T细胞免疫应答。疫苗具有抗原表达持久、免疫记忆维持时间长的特点，抗体滴度与mRNA-LNP相当。

本研究利用HA特异性B细胞探针（货号：11055-V08B1）通过流式细胞术检测样本中的生发中心（GC）B细胞和抗原特异性记忆B细胞。结果显示，小鼠在免疫14天后，DNA-LNP组的HA特异性GC B细胞频率和绝对数显著低于mRNA-LNP组（图D-F）。免疫后1年检测脾脏中的记忆B细胞，核酸疫苗组的HA特异性B细胞无统计学差异，约是佐剂蛋白组的2倍（图G-I）。

HA特异性B细胞探针用于疫苗免疫应答评估（源自文献：doi: 10.1016/j.xcrm.2025.102035）

靶向HA的单克隆抗体可以作为病毒预防制剂，也可作为下一代疫苗的设计模板。Maurer等人通过B细胞分选探针获得亚型内广谱中和单抗，可识别H1或H3的HA球状头部。H1亚型单抗能结合1933-2011年间流感毒株HA的特异性表位，用于研究病毒逃逸机制。H3亚型单抗通过冷冻电镜解析其表位，鉴定保守位点用于下一代疫苗设计。

B细胞分选探针抗原购自义翘神州（货号：11055-V08B1）A/California/04/2009（H1N1）全长胞外域HA重组蛋白。此蛋白为三聚体构象，带有His标签，Y108F突变消除HA对细胞表面唾液酸的结合，实现抗原特异性B细胞的精准流式检测与分选。将HA重组蛋白与APC、PE标记链酶亲和素按照4:1的摩尔比混合，冰上孵育20分钟，组装成荧光标记HA四聚体探针，用于分选人外周血单个核细胞（PBMC）中的B细胞。

HA探针用于B细胞分选和抗体筛选（源自文献：doi: 10.1126/sciadv.adu9140）

靶向流感病毒HA和NA糖蛋白的广谱中和抗体正在研发中，其对感染进程的影响和潜力尚未得到充分验证。Moirangthem等人构建了一种可同时中和HA和NA的双特异性抗体（BiAb），既能阻断病毒侵袭也能抑制子代病毒从感染细胞中释放，效果优于单抗联合方案。在小鼠模型中，此双抗表现出更强的抗病毒活性，有效控制病毒感染。

HA重组蛋白（货号：11055-V08B1）用于ELISA和BLI检测。ELISA结果显示，BiAb特异性结合HA蛋白，且HA和NA共包被时，结合信号显著强于单一抗原，证实双抗能同时结合双靶点。BLI实验测得BiAb与HA的结合解离常数KD为4.397 nM，保留了亲本抗HA抗体的良好亲和力。

双特异性抗体与HA、NA的结合活性（源自文献：doi: 10.1016/j.ymthe.2024.07.023）

用于广谱流感疫苗设计。Yi Liu等人以7株不同谱系的毒株HA胞外域为骨架，融合AVI标签构建乙型流感HA特异性B细胞标记探针，定量分析人外周血中记忆B细胞的频率与活化类型，分离并表征多株人源单克隆抗体，鉴定病毒逃逸关键位点，为广谱乙型流感疫苗设计提供数据。

通用流感疫苗免疫原设计和效价评估新视角。Aartse等人制备了一组HA重组蛋白探针，所有全长和头部探针均引入Y98F（同Y108F）点突变，消除HA与细胞表面唾液酸结合，保留天然抗原表位。通过流式细胞术分析6名健康成人外周血的HA特异性B细胞亚群，并分选单细胞克隆单抗。结果发现54-77%的HA三聚体特异性B细胞仅能结合HA三聚体探针，仅有8-18%的B细胞可识别茎部探针，9-23%的B细胞可识别头部探针。分离获得的靶向HA头部表位的抗体对H1N1病毒具有广谱中和活性，靶向茎部单抗也可中和多种H1N1毒株，对开发通用流感疫苗具有参考价值。

探索疫苗诱导的生发中心B细胞应答机制。McIntire等人将HA重组蛋白经生物素化标记制备荧光流式探针，用于检测外周血及引流淋巴结中的HA特异性B细胞亚群，并分选靶细胞开展单细胞BCR测序和单抗制备，用于研究生发中心B细胞成熟过程影响疫苗接种后诱导的B细胞应答广度与持久性，为通用疫苗通过延长GC反应优化免疫原性提供依据。

义翘神州HA特异性B细胞探针系列产品专为流感疫苗免疫评价与B细胞研究开发。产品通过重组表达HA，偶联AVI、His标签，可直接用于流式检测或分选HA特异性B细胞，覆盖H1N1、H3N2、H5N1、H7N9及乙型流感等多亚型，广泛适用于疫苗免疫原性评价、广谱疫苗候选株筛选、抗病毒单克隆抗体发现等研发。

【参考文献】

1. Tursi NJ, et al. Modulation of lipid nanoparticle-formulated plasmid DNA drives innate immune activation promoting adaptive immunity. Cell Reports Medicine 2025.

2. Maurer DP, et al. Conserved sites on the influenza H1 and H3 hemagglutinin recognized by human antibodies. Science Advances 2025.

3. Moirangthem R, et al. Dual neutralization of influenza virus hemagglutinin and neuraminidase by a bispecific antibody leads to improved antiviral activity. Molecular Therapy 2024.

4.Liu Y, et al. Cross-lineage protection by human antibodies binding the influenza B hemagglutinin. Nature Communications 2019.

5. Aartse, et al. Influenza A Virus Hemagglutinin Trimer, Head and Stem Proteins Identify and Quantify Different Hemagglutinin-Specific B Cell Subsets in Humans. Vaccines 2021. vaccines9070717

6. McIntire KM, et al. Maturation of germinal center B cells after influenza virus vaccination in humans. Journal of Experimental Medicine 2024.