SuperSrt连接酶：连接活性提升100倍，水解风险降至0.08%，助力ADC定点偶联

随机偶联通过抗体的半胱氨酸或赖氨酸残基侧链产生具有不同DAR的ADC异质混合物，使其效果、药代动力学和稳定性不可控，成为ADC发展的瓶颈。定点偶联技术正在成为关键，可对载荷的连接位置与数量实现更精准的控制，提高ADC的均一性和稳定性。

酶法定点偶联具有特异性强、反应条件温和的优势，受到广泛关注。其中，常用的酶有转肽酶Sortase、天冬酰基肽连接酶（PALs）、甲酰甘氨酸生成酶（PGE）等。SuperSrt是义翘神州基于高效重组酶HERE平台自主开发的Sortase酶突变体，在连接活性和水解副反应控制等性能上实现数量级提升，为ADC、RDC及靶向递送等开发提供成本可控的解决方案。

为什么需要定点偶联呢？传统的ADC多采用赖氨酸随机偶联或链间二硫键还原偶联。而一个抗体上可发生偶联的赖氨酸位点约有数十个，组合后可产生数量极为庞大的组分。二硫键还原也会出现不同DAR的异质性ADC。随机偶联会带来高度异质性，使体内效果、毒性、半衰期不可预测，批间稳定性难控制，给CMC和申报带来麻烦。定点偶联能在抗体确定位置、接上确定数量的药物，使DAR可控，获得均一、稳定、可重复的ADC分子。

通过酶识别抗体上特定的氨基酸位点进行修饰，使其与毒素进行特异性结合。酶法反应条件温和，几乎不会对抗体活性造成损伤，体内稳定性、半衰期、安全性都优于随机偶联，适合开发高要求、高异质性的新一代ADC。

Sortase A 是一种转肽酶，用于定点偶联的代表性工具酶之一。Sortase A催化转酰胺反应，识别目的蛋白/抗体上的特定肽序列，通常为LPXTG（X表示任何氨基酸），并在苏氨酸（T）和甘氨酸（G）残基之间进行切割，形成酰基酶中间体。随后接头上的寡聚甘氨酸游离N端氨基进攻该中间体，形成新的肽键，完成抗体与毒素、荧光基团或其他标签的连接。

Sortase A介导的抗体-药物偶联反应示意图（引自DOI: 10.1002/smll.201602267）

Sortase A自2004年首次被报道用于蛋白质或多肽的连接以来，广泛用于蛋白质组学、生物工程技术、生物医药等领域。但野生型催化活性较低，为提高连接效率、降低水解副反应，研究人员对野生型Sortase A进行了升级改造。

为了提高酶的连接活性和降低水解反应，义翘神州通过高效重组酶HERE平台开发了新型转肽酶突变体。SuperSrt（货号：SRT01）相比于野生型Sortase A，连接活性提升约100倍（312 U_L/mg vs 3 U_L/mg），水解风险降至0.08%（约降低24倍）；相比于应用更广的eSrtA，连接活性提升约7.6倍，水解风险降低约8.7倍。

SuperSrt与eSrtA、野生型Sortase A的连接活性与水解风险对比（源自义翘神州检测结果）

SuperSrt通过识别不同位置的LPXTG序列，用于抗体重链、轻链及轻重链同时定点偶联标记。除完整IgG，SuperSrt还可用于Fab、scFv、VHH等不同形式的偶联反应。经测试，SuperSrt可用于50多种不同的化学接头结构，包括常用的Gly4接头，应用场景覆盖ADC、RDC、体内CAR及靶向LNP等。

SuperSrt可适配的抗体形式、连接位点与接头结构（源自义翘神州产品资料）

高效催化特定序列的蛋白质或多肽之间的共价连接反应

识别多种含有LPXTG序列的底物，适用于不同形式的抗体

通过优化钙离子浓度、底物浓度和反应时间，精确控制SuperSrt酶的催化反应，提高反应效率和产率

SuperSrt是义翘神州基于高效重组酶HERE平台自主开发的Sortase酶突变体，在连接活性和水解副反应控制等性能上实现数量级提升，为ADC、RDC及靶向递送等开发提供成本可控的解决方案。