「WB急救室」甲醇vs乙醇，是时候换掉转膜液中的这个“毒瘤”了！（附WB实验优化指南）

01 甲醇：WB实验的“阿喀琉斯之踵”

甲醇对获得高质量的Western blot结果至关重要。在WB实验中，甲醇具有活化膜、防止膜干燥和卷曲、提高膜转移效率、降低膜背景、防止蛋白质聚集等作用，具体表现为：

1. 增强蛋白质与膜的结合

在电泳过程中，为了增加蛋白质的负电荷、促进其泳动速率，需要添加SDS。但是SDS会阻止蛋白质与膜的吸附。甲醇可以破坏SDS与蛋白质间的结合，释放蛋白质，从而增强蛋白质与膜的结合，提高转膜效率。甲醇浓度越高，SDS与蛋白质分离越快。然而高浓度的甲醇会固定蛋白质，反而不利于其从凝胶中跑出来。因此，需要严格控制甲醇浓度，通常为20%，但对于不同分子量的蛋白质，需要适当调整。

2. 活化PVDF膜

甲醇可以使PVDF膜上的电荷活化，转膜更充分。同时，甲醇预处理能够增强PVDF膜的亲水性，使膜更容易被转膜液浸润。

3. 降低膜背景

甲醇能够与膜上的非特异性杂质结合，降低噪音，提高WB检测的灵敏性。

4. 防止凝胶膨胀

在湿法转移过程中，甲醇的存在有助于防止凝胶膨胀，并减少大分子在凝胶中的沉淀。甲醇有助于维持凝胶的完整性，确保蛋白质顺利从凝胶迁移到膜，还能显著提高转膜效率。

5. 降温作用

转膜过程中会造成电解质消耗，导致转膜液温度升高，这可能会引起蛋白质的变性降解。甲醇的挥发帮助降低转膜液的温度，稳定电转过程。

6. 增加蛋白质溶解度

甲醇在转膜液中作为有机溶剂和渗透率，能够增加蛋白质在转膜液中的溶解度，使转膜更高效。

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但是！甲醇用多了存在危害！使用甲醇过程中，一定要戴好口罩和手套！

甲醇经皮肤、呼吸道和消化道被人体吸收进入血液循环后，通过乙醇脱氢酶代谢为甲醛、甲酸，引发代谢性中毒及氧化应激损伤。长期接触甲醇可以导致皮肤干燥、粗糙、龟裂，甚至引发皮炎和溃疡。

甲醇还会对中枢神经系统、视神经、呼吸系统造成损害。初期症状可能包括头痛、眩晕、恶心、呕吐、视力模糊、视野缩小。甲醇中毒可能导致呼吸中枢抑制，引起呼吸困难，严重时可能导致呼吸衰竭。

不知您的实验室有没有这样的操作呢？用鼻子闻味区分电泳液和转膜液。因为添加甲醇的转膜液和电泳液在外观上没有区别，但是甲醇有刺激性。我们用鼻子闻一闻就可快速鉴定。现在知道了甲醇的危害，您还敢挑战鼻子嗅觉的灵敏度吗？

02 乙醇：被低估的“全能替代者”

亲，看完这篇文章，你是不是也想用乙醇代替甲醇呢？