「WB急救室」不再一脸懵！裁膜VS整膜，手把手教你搞定期刊投稿难题！

在WB实操中，研究人员需要根据实验的具体需求和条件选择裁膜还是整膜。接下来我们就说一下各自的具体操作步骤、技巧和注意事项。

（1）准备阶段：工作台要干净无尘，使用的工具无菌。

推荐使用新的手术刀片，刀刃锋利保证裁剪边缘整齐。不建议使用剪刀，其刀刃锋利程度可能难达要求，容易导致膜边缘不平整。此外还需准备一块平整的切割板，如塑料板或玻璃板。为了保证裁成一条直线，可以准备一把钢尺或其他横切面平整的工具，如就地取材的玻璃板。

（2）做好标记：在裁膜前确定Marker位置。使用直尺和铅笔在膜的一角轻轻标记尺寸，注意不要用力过大，以免损伤膜。如果使用预染Marker，能够直观的确定目的蛋白位置，操作更简便准确。

（3）裁切操作：将膜放在切割板上，用钢尺或玻璃板轻压膜，对齐目的蛋白缓慢、平稳的切割。切割时，刀片与膜垂直，用力均匀，避免出现锯齿状边缘。如果使用剪刀，需先将膜的一边对准剪刀刃口，沿着标记线慢慢裁剪。过程中要保持剪刀平稳，不要左右晃动，防止膜被剪歪。

1）避免膜与皮肤接触：手上的油脂、杂质可能会污染膜，影响实验结果。在操作过程中，最好戴上手套。

2）刀片要锋利：推荐手术刀，减少膜的撕裂和蛋白质损失。

3）裁切要稳：速度要均匀，避免过快或过慢导致裁切不整齐。

4）目的蛋白位置判断要准确：建议使用精准度高的Marker或预染蛋白Marker。也可以选择丽春红染色，在转膜后短暂显色，确定位置后再裁。丽春红染色是可逆的，不影响后续的抗体结合。

裁膜合并是指将不同的膜条按照分子量对齐后，合并到一张图像中进行分析。可以节省抗体，减少实验成本。

操作步骤：

（1）根据Marker确定条带位置，并进行对齐。

（2）使用图像处理软件将对齐后的条带合并到一张图像中。

（3）调整合并后的条带对比度和亮度，确保一致，便于进行比较分析。

整膜孵育单次只能检测一个目的蛋白，如果膜上有其他蛋白需要检测（如内参蛋白），则需要将已检测过的抗体进行剥离，然后再次进行孵育。

操作步骤：

（1）在完成第一次抗体检测后，将膜完全浸泡于膜再生液中。

（2）在50℃水浴或常温孵育，剥离抗体。

（3）使用TBST或PBST清洗膜，去除残留的再生液。

（4）重新封闭膜，并进行新的抗体孵育。

表1.常见膜再生液配方