EliteRmab®兔单抗的生产制备策略：三大核心技术引擎介绍

单克隆抗体已经成为生命科学研究、体外诊断和免疫治疗领域的重要工具，特别是兔单抗技术的成熟正在加快相关领域的研究进展、兔子具有独特的免疫优势。结合噬菌体展示、B细胞克隆等现代抗体工程技术，兔单抗在亲和力、特异性、表位识别等方面远远兔单抗。

义翘神州基于自主搭建的综合性兔单抗开发平台精心打造的EliteRmab^®重组兔单抗，展现出皮摩尔级别的超高亲和力、卓越的特异性、广泛的表位识别能力等。EliteRmab^®产品采用重组技术生产，批次稳定，规模化供应，已成为生命科学前沿研究、体外诊断试剂开发、治疗性抗体药物的早期发现与筛选等领域的优质选择。

 

一、兔免疫系统：自然选择赋予的独特优势

 

兔免疫球蛋白重链（IGH）基因座包含200余个IGH可变种系基因，其中超过50%被发现为“无功能”基因。兔重链可变区（VH）抗体库的多样性相对有限，但轻链可变区（VL）抗体库的多样性则高于小鼠和人类。绝大多数兔抗体由IGHV1基因编码。此外，兔轻链可变区抗体库的互补决定区L3环（CDR-L3）长度显著长于人类和小鼠的对应区域。

 

01 特异性识别增强

 

兔B细胞的发育过程与人类和小鼠存在差异，抗体亲和力成熟过程同时包含体细胞高频突变和体细胞基因置换两种机制，而小鼠仅具备体细胞高频突变这一种机制。因此，兔单克隆抗体具有更高特异性和更广抗原表位识别范围的潜力。如研究人员制备的靶向β淀粉样蛋白1-37（Aβ37）的兔单克隆抗体，在ELISA和WB实验中不与Aβ36、Aβ38、Aβ39、Aβ40、Aβ42发生交叉反应。

 

02 抗原表位更广

 

抗体亲和力指的是抗体分子与半抗原分子或抗原分子决定簇发生反应的能力。抗体亲和力的大小可以用解离常数（KD）（质量摩尔浓度/L）来表示。研究发现兔单抗的亲和力是鼠单抗的10至100倍，KD可达到皮摩尔级别（KD=10−12 mol/L）。基于这一特性，开发灵敏度更高的兔单抗检测方法具有更大应用潜力。

 

FDA批准的可用于体外检测的兔单抗（源自文献：doi: 10.46701/BG.2023012022038）

 

兔抗体重链和轻链CDR3分别约15与12个氨基酸，明显长于小鼠，具有更灵活的抗原结合能力，尤其适合识别小分子（如激素、药物残留）或高度保守的抗原表位（如跨物种同源蛋白）。

 

03 识别表位更多

 

与小鼠相比，兔子具备更全面的脂质和糖脂抗原提呈能力，这使得兔源抗体拥有更广谱的抗原结合位点。Pan等人利用一种兔单抗，鉴定出一个新型的表位抗原：HIV-1包膜蛋白gp120第三可变环（V3环）上的10A37表位。研究结果表明，新表位结构与人类抗体所结合的表位结构相似，可作为潜在的疫苗靶点，为HIV-1疫苗研发提供新思路。

 

稀有抗原表位往往是更具价值的抗体成药性表位，兔抗可变区的突变数量比鼠抗多三分之二，可通过有限的种系基因，产生多样化的抗体库，进而针对靶抗原形成更丰富、更复杂的免疫应答，并特异性识别某些抗原表位，例如磷酸化肽段、糖类以及聚糖。

 

免疫球蛋白结构更简洁

 

兔源IgG仅有一种同种型，其N端和D-E环的氨基酸残基数量更少，且重链可变区存在二硫键。研究人员推测，二硫键有助于提升抗体的稳定性。兔源IgG的轻链类型较少：90%-95% 的轻链为Cκ1型，仅有5%-10%为λ型。兔源抗体易于进行基因工程改造和操作，为抗体药物的研发拓展了更多可能性。

 

不同种属IgG的种类（源自文献：doi: 10.46701/BG.2023012022038）

 

05 杂交瘤细胞更多

 

兔的脾脏比鼠大，可用于融合的B淋巴细胞数量约为小鼠的50倍，这使得融合实验能够获得数倍于小鼠的杂交瘤细胞。结合高通量筛选技术，就能够制备出更多种类的抗体。此外，与鼠源杂交瘤细胞相比，兔杂交瘤细胞更适合高密度培养，具备筛选时间更长、细胞传代间隔更短且实验可塑性更强的特点。

 

二、兔单抗体开发技术路线

 

01 噬菌体展示技术

 

自1985年噬菌体展示技术被开发以来，该技术已成为应用最广泛、发展最成熟的体外抗体筛选技术之一。这一技术利用基因工程将抗体基因连接到噬菌体中，并以融合蛋白的形式展示在其表面。通过与靶蛋白的结合完成抗体筛选。噬菌体展示技术包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤。义翘神州利用灵活的筛选策略、多种筛选方法以及上清介入检测，筛选的成功率达到90%。

 

噬菌体展示技术结合纳米抗体开发平台，可使效价达到128K，库容达到10⁹，插入正确率高于90%，亲和力可达到10^-8-10^-9，兔单抗开发效率显著提高。

 

兔单抗制备技术（源自文献：doi: 10.3389/fimmu.2017.00494）

 

02 B细胞流式分选技术

单B细胞抗体制备技术是一类快速制备单克隆抗体的技术。单个B细胞只含有一个功能性重链和轻链可变区DNA序列，即只产生一种特异性抗体。利用这一特性，从免疫动物组织或外周血中分离抗原特异性B细胞，然后通过单细胞PCR技术扩增IgG重链和轻链可变区基因，再通过哺乳动物细胞表达获得具有生物活性的单抗。

义翘神州单B细胞流式分选后的细胞有两种处理方式：

直接裂解细胞进行扩增，最大限度的得到阳性克隆；

将分选好的单细胞先在体外培养扩增，再挑选阳性细胞克隆扩增抗体可变区基因，最后进行抗体的重组表达和验证。

 

03 B细胞Beacon^®筛选平台

 

Beacon^®单细胞光导系统结合光电定位技术与微流控设计，在一张芯片上精准完成单细胞挑选和检测，还可根据实验时特定的结果导出目的细胞，更好的保留B细胞多样性。在抗体发现早期阶段获得高质量的阳性hits，避免“优秀克隆”的丢失。

 

义翘神州单B细胞Beacon^®平台，自动筛选上万个浆细胞，将传统杂交瘤技术需要1-2个月的筛选工作，缩短至仅需1天完成，并在1天内可完成5项细胞功能检测。整个筛选过程对细胞无损伤，保证细胞的活性。

 

义翘神州兔单抗产品

基于以上兔单抗开发平台，义翘神州精心打造的EliteRmab^®重组兔单抗，展现出皮摩尔级别的超高亲和力、卓越的特异性、广泛的表位识别能力。EliteRmab^®产品采用重组技术生产，批次稳定，规模化供应，已成为生命科学前沿研究、体外诊断试剂开发、治疗性抗体药物的早期发现与筛选等领域的优质选择。

 

【参考文献】

1.Zhang Z, Liu H, Guan Q, Wang L and Yuan H. Advances in the Isolation of Specific Monoclonal Rabbit Antibodies. Front. Immunol. 2017. doi: 10.3389/fimmu.2017.00494

2.Zhongwei Chen, Gengyin Wang. Progress and perspectives of rabbit monoclonal antibodies. Blood and Genomics, 2023.

3.Alessandro Pedrioli and Annette Oxenius. Single B cell technologies for monoclonal antibody discovery. Trends in Immunology. 2021.

4.Justus Weber, Haiyong Peng and Christoph Rader. From rabbit antibody repertoires to rabbit monoclonal antibodies. Experimental & Molecular Medicine, 2017. doi:10.1038/emm.2017.23