Anti-VAR-EPO特异性抗体：精准识别基因多态性，助力兴奋剂检测

前言

世界的目光将再次被冬奥会吸引，2026年米兰-科尔蒂纳冬奥会即将开幕。与此同时，反兴奋剂的话题也将再次被人们提及。重组人促红细胞生成素（rhEPO）的滥用检测一直是核心难题。然而，一个鲜为人知的技术盲区正威胁着检测的公正性——约0.5-1%的东亚人群携带的EPO基因多态性（c.577del）会产生内源性突变型EPO（VAR-EPO），其分子量与rhEPO高度相似，极易导致现有检测方法产生误判。

 

受北京兴奋剂检测实验室委托，北京义翘神州科技股份公司成功开发出高亲和力Anti-VAR-EPO兔单克隆抗体，为全球反兴奋剂检测提供了精准识别VAR-EPO的关键工具，确保检测结果不被基因多态性干扰。

 

1 背景：EPO检测困境

 

促红细胞生成素，也叫促红素（Erythropoietin，EPO），是肾小管周围间质细胞分泌的一种造血生长因子。该糖蛋白由165个氨基酸组成，分子量约为 30kDa，生理功能是促进骨髓红细胞的生成和释放。

 

1985年，Lin等人成功在CHO细胞中表达重组人促红细胞生成素（rhEPO），为大规模生产和临床应用奠定了基础。1989年美国安进（Amgen）公司的rhEPO药物Epogen获批上市，用于治疗慢性肾功能不全所致的贫血。Amgen于2002年又成功上市“高糖基化”的长效重组促红素药物Arnesp。国内亦有沈阳三生制药、上海麒麟鲲鹏等公司生产rhEPO药物。

 

rhEPO因具有提高机体携氧能力，增强运动耐力的特性，在耐力型体育项目中得到滥用，如长跑、自行车、划船、游泳等。这一“治疗贫血的良药”沦为了兴奋剂。为此，国际奥委会于2000年8月1日审查通过rhEPO兴奋剂检测方法。2005年，rhEPO被列为体育竞技中禁用的肽类物质。

 

近年来，世界各国兴奋剂检测实验室主要采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）或N-月桂酰肌氨酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SAR-PAGE）联合蛋白免疫印迹检测人体尿液或血液样本中的rhEPO。但内源性EPO与rhEPO的差别极小，且检测窗口期非常短，其检测方法面临灵敏度和特异性的双重挑战。

 

2 新挑战：东亚人群特异的基因多态性

 

研究发现，在约0.5-1%的东亚人群中存在一种天然突变的促红细胞生成素变异体（Arg193AspfsTer28, VAR-EPO）。VAR-EPO包含完整的野生型促红细胞生成素（WT-EPO）氨基酸序列，同时在C端额外延长26个氨基酸，导致分子量增加3.1kDa。

VAR-EPO与rhEPO结构相似，导致大多数市售抗EPO抗体能够识别VAR-EPO，造成依靠分子量差异的兴奋剂检测方法无法有效区分rhEPO和VAR-EPO。这将使携带该基因多态性的运动员面临误判的风险，因为其尿液或血液样本中天然存在的VAR-EPO可能会被判为外源性使用rhEPO，竞技比赛的公平性受到挑战。

 

3 解决方案：特异性Anti-VAR-EPO抗体

 

为应对这一新的挑战，北京兴奋剂检测实验室委托义翘神州开发了Anti-VAR-EPO兔单抗（货号：110210-R0016S），具有如下突出特色：

 

· 特异性强：靶向VAR-EPO的独特结构

 

· 无交叉反应：与WT-EPO或rhEPO均无交叉反应

 

· 亲和力强：抗体与VAR-EPO多肽的结合达到纳摩尔级

包被重组VAR-EPO或WT-EPO蛋白，加入Anti-VAR-EPO兔单抗（货号: 110210-R0016S），抗体结合VAR-EPO蛋白的EC50为136.07 pg/孔。	Protein A芯片捕获Anti-VAR-EPO兔单抗(货号: 110210-R0016S)，抗体结合VAR-EPO多肽的亲和力常数为0.486 nM（SPR实验，Biacore 8K）。

 

4 实用案例

北京兴奋剂检测实验室对Anti-VAR-EPO的应用进行了验证。确证检测采用双向免疫纯化联合蛋白免疫印迹的检测技术进行。当兴奋剂检测初筛结果发现rhEPO可疑结果后，将样品先通过Anti-VAR-EPO兔单抗进行反向免疫纯化（RI），富集并去除样品中的VAR-EPO。再采用其他Anti-EPO抗体进行正向免疫纯化（NI），富集样本中的WT-EPO和rhEPO。采用SAR-PAGE联合蛋白免疫印迹分别检测两步富集所得目标物。如果RI洗脱液检出VAR-EPO条带，说明该样品来源于携带EPO基因多态性c.577del的人群。

 

尿液样本检测结果（源自参考文献：doi: 10.1016/j.jshs.2025.101062）

 

Anti-VAR-EPO抗体的问世，不仅填补了EPO基因多态性检测的技术空白，更重要的是为携带VAR-EPO的运动员提供了"自证清白"的科学依据，同时确保真正的兴奋剂违规者无处遁形。该抗体现已开放供应（货号：110210-R0016S），欢迎咨询！

 

【参考文献】
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