「新品速递」通用型Whitlow218 Linker兔单抗，高效助力CAR流式细胞检测

引言

CAR-T细胞疗法在血液肿瘤治疗中屡创奇迹，目前正在实体瘤领域“开疆拓土”。2025年6月1日，The Lancet（柳叶刀）发表北京大学沈琳教授团队主导的全球CLDN18.2 CAR-T 胃癌随机对照研究的阳性结果：无进展生存期显著延长，总生存期延长44%。近年来CAR-T在系统性红斑狼疮、多发性硬化症等自身免疫性疾病领域展现出巨大的潜力。

但是，在CAR-T研发进程中，长期面临一个棘手的难题。每一种新CAR靶向肿瘤新抗原设计，需要每一次迭代开发相应的经独特验证的检测试剂，以确定CAR表面表达。这一过程不仅成本高昂、费时费力，还可能因抗体特异性不足导致数据偏差，严重拖慢项目进度。

如今，这一难题迎来了“通用型”的解决方案。义翘神州推出全新的Whitlow218 Linker兔单抗，特异性结合scFv片段重链和轻链间的Whitlow218 Linker序列。Whitlow218 Linker兔单抗不区分CAR-T靶点，具有多靶点多CAR结果通用的特点。兔单抗还具有高亲和力、高特异性的优势。义翘神州已成功开发FITC、PE标记的适用于流式细胞术的单克隆抗体，APC、AF488、AF647、Biotin等标记的抗体也在开发中，将会陆续上线。

CAR表达检测：CAR-T疗效评估与质量控制的核心

在详细了解抗CAR Linker单抗这一新颖的检测技术之前，我们先简单复习一下CAR-T细胞的结构和功能。

CAR（嵌合抗原受体）是一种经过基因工程改造的受体，结合了抗体的抗原识别能力与T细胞激活功能。CAR主要由四部分组成：

1）胞外抗原结合结构域：CAR的核心区域，负责识别肿瘤细胞表面的特定抗原。通常为单链可变片段（scFv）或抗原结合区，具有高度特异性。

2）铰链结构域：连接抗原结合结构域及跨膜结构域，有助于维持抗原结合域的空间构象，促进抗原结合效率。

3）跨膜结构域：确保受体嵌入T细胞膜，保持其稳定性和功能性。

4）胞内信号传导结构域：CAR激活T细胞的关键，一般为CD3ζ或CD3ε等T细胞受体的胞内结构域，以及共刺激分子CD28、4-1BB等，可以增强T细胞的持久性和抗肿瘤活性。

CAR结构示意图（源自文献：doi: 10.1186/s40364-017-0102-y）

CAR细胞阳性率是评估CAR-T细胞产品活性的重要指标，直接影响对肿瘤靶点的识别能力和杀死效应。CAR-T细胞回输到患者体内，检测其在外周血或组织中的CAR表达情况，有助于评估细胞的扩增能力和体内持久性，对判断治疗反应、疗效持续性乃至复发风险具有重要参考价值。同时，动态检测CAR-T细胞表达变化，可评估其潜在免疫原性及安全风险。因此，建立一套灵敏、可靠、通用的CAR表达检测系统，对CAR-T细胞疗法的开发和评价至关重要。

目前，获批上市的CAR-T细胞靶向CD19或BCMA，所以在CAR-T患者诊断中，以重组人BCMA或CD19蛋白检测CAR的流式细胞术占据主导地位。这种方法精确性和特异性很高，但仅限于检测单一特定靶点，不适合CAR-T筛选发现及临床前研究。

科研人员已开发多种CAR检测方法，比如结合到免疫球蛋白的Protein L，或结合到抗体Fc段的多克隆抗体。Protein L与免疫球蛋白κ轻链结合，不能检测包含λ链的CAR。多克隆抗体可能与患者自身IgG发生交叉反应，导致假阳性。还有抗独特型抗体，与CAR抗原结合区独特位结合，具有高度的特异性和敏感型，背景染色较低，但是抗独特型抗体难获得。
 

CAR不同检测技术（源自文献：doi: 10.1016/j.omtm.2024.101328）

抗连接子（linker）单抗带来了通用型CAR检测的“希望之光”。大多数CAR包含单链可变片段（scFv），Carvykti除外（具有独特的纳米抗体结构VHH）。scFv带有柔性Whitlow218或G4S连接子。连接子广泛应用于CAR构建中，标准化的氨基酸序列提供明确的靶标。不管CAR-T识别的肿瘤抗原是什么（如CD19、BCMA、Claudin18.2、CD22），只有其结构中含有连接子，抗连接子抗体均能准确的检测。与依赖scFv抗原特异性检测方法相比，抗连接子抗体显著提升检测的通用性和一致性。
 

基于连接子检测CAR阳性率技术原理（源自文献：doi: 10.3390/biomedicines12081641）

 

抗218 Linker 抗体：高效CAR检测利器

其中218 linker具有良好的柔性和稳定性，是CAR构建中使用最广泛的连接子之一，近90%的基于scFv结构的CAR会选择这一连接子。218 linker由Whitlow等人于1993年首次报道，其氨基酸序列为GSTSGSGKPGSGEGSTKG，能促进VH和VL间的正确构象折叠，进而提高scFv的功能稳定性。

为了实现高效标准化的CAR检测，针对CAR结构中linker区域的特异性抗体逐渐火热，具有以下5大核心优势：

全场景通用：不管CAR靶向那种抗原，只有含有Whitlow218 Linker序列，就可用该类抗体进行检测，告别“一CAR一试剂”的定制化困境。

多标记选择：义翘神州抗Whitlow218 Linker抗体可以用于FITC、PE标记的流式细胞术并且APC、AF488、AF647、Biotin等标记的抗体也在开发中，即将上线。

特异性超高：自研开发的兔单克隆抗体，流式细胞术检测显示，PBMC非特异结合低于0.5%。

体内外通用：不受实验环境限制，可用于体外检测CAR-T细胞转染效率，也可在体内动态追踪CAR-T细胞扩增效果。

研发速度加快：省去定制化检测试剂的开发与验证步骤，CAR设计、表达验证周期更快速。

抗218 Linker 抗体 （验证数据：用结果说话）

高效识别CAR阳性细胞

 

Flow cytometric analysis of anti-ERBB2 CAR expression on anti-ERBB2 CAR-transfected 293T cells. Cells were stained with PE-conjugated anti-Whitlow 218 linker Antibody (Cat: 111774-R0013-P). The fluorescence histograms were derived from gated events with the forward and side light-scatter characteristics of intact cells. Non-transduced 293 cells were used as a control (right).

高特异性结合

 
Binding activity of FITC-conjugated anti-Whitlow 218 linker Antibody to PBMC cells. PBMC cells were stained with PE conjugated anti-CD3 antibody and FITC-conjugated anti-Whitlow 218 linker Antibody (Cat: 111774-R0013-F) and detected by flow cytometry. FITC signal was used to evaluate the non-specific binding activity to PBMCs.

 

义翘神州Whitlow 218 Linker兔单抗产品
货号	标记	应用
111774-R0013-F	FITC	FCM
111774-R0013-P	PE	FCM
111774-R0013-D	AF 488	FCM
111774-R0013-G	AF 647	FCM
111774-R0013-B	Biotin	FCM
111774-R0013-A	APC	FCM

 

总之，抗Whitlow218 Linker兔单抗贯穿CAR-T研发全流程。临床前可快速评估CAR细胞阳率，在CMC质控中提供稳定、可重复的数据，在临床前动物模型中，动态监测CAR-T细胞的体内扩增情况。

义翘神州综合性CAR-T开发解决方案
除了抗Whitlow218 Linker兔单抗外，义翘神州还提供综合性的CAR-T细胞疗法解决方案，从CAR开发、T细胞激活、慢病毒包装、CAR-T细胞扩增到CAR-T细胞质量控制，全面支持CAR-T研究。
 
参考文献：
1. Katharina Schindler, et al. Linker-specific monoclonal antibodies present a simple and reliable detection method for scFv-based CAR NK cells. Molecular Therapy: Methods & Clinical Development. 2024

2. Grahnert, Aet al.Evaluation of Anti-CAR Linker mAbsfor CAR T Monitoring afterBiTEs/bsAbs and CAR T-CellPretreatment. Biomedicines 2024

3. Zhiwei Wang, et al. CAR-T therapy dilemma and innovative design strategies for next generation. Cell Death and Disease, 2025