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北京义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)
入驻年限：17 年
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北京
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技术服务、试剂、抗体、细胞库 / 细胞培养、ELISA 试剂盒
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「ELISA问诊室」样本处理方法不对=实验白做！成功的“秘籍”都在这里了，让你少走90%的弯路！
9 人阅读发布时间：2026-03-25 14:24
ELISA是一种快速、灵敏、准确可靠的定性定量检测方法，可检测样本范围十分广泛，比如血液（血清、血浆）、组织匀浆或提取物、细胞培养上清、细胞裂解液、分泌物（唾液、乳汁）、排泄物（尿液、大便）等，甚至还可以检测土壤中的蛋白样品。
不同类型样本的处理方法也大相径庭。有些样本可直接进行测定，有些则需预处理。如何正确处理这些样本，是确保ELISA实验准确性的第一步，也是实验中经常遇到并需要认真对待的问题。
「ELISA问诊室」第7期，汇总不同类型样本的处理方法，供大家参考。
一、血液样本
1. 血清
血清是ELISA实验常用的样本之一，其预处理过程也比较简单。基本操作步骤如下：
✔ 用真空采血针采集新鲜血液2mL，加入无菌试管或离心管中。
✔ 将试管或离心管在室温放置1-2小时或4℃过夜。血液自然凝固过程与温度有关，温度越低凝聚越缓慢。
✔ 4℃，3000rpm离心10-20分钟。
✔ 取上清，弃沉淀。
✔ 根据实验需要，取适量上清进行ELISA检测。
✔ 剩余上清可分装冻存于-20℃或-80℃。分装是为了避免反复冻融。如出现沉淀需再次离心。
2. 血浆
血浆需要抗凝，常用的抗凝剂有EDTA钠盐、肝素钠、枸橼酸钠或柠檬酸钠。检测前请仔细阅读ELISA试剂盒说明书，查看该试剂盒针对抗凝剂是否有特殊要求。
血浆的处理步骤主要为：
➢ 将全血收集到无菌的含抗凝剂的试管中，轻轻混匀。
➢ 4℃，3000rpm离心10-20分钟。
➢取上清，弃沉淀。
➢立即取适量血浆进行检测，或分装冻存于-20℃或-80℃。
二、组织样本
动物或人体组织进行ELISA检测，需要制成组织匀浆。
(1) 用预冷的PBS缓冲液（0.01M，pH=7.4）或生理盐水洗涤组织。
(2) 称重，再将其切成尽可能小的碎块。加入适量预冷的PBS，一般按1:9的重量体积比添加，比如1g的组织样品需加入9mL PBS。建议在PBS中加入蛋白酶抑制剂（如1mM PMSF）。
(3) 通过手工研磨或匀浆机处理样本，也可选择超声粉碎。
(4) 将制备好的匀浆在4℃ 5000g离心5分钟，留取上清用于检测，或分装冻存于-20℃或-80℃。
三、细胞样本
细胞培养上清
采集细胞培养上清500 μL到无菌试管中，4℃，2500 rpm离心5-10分钟，将澄清的细胞培养上清液移至新的离心管中，弃沉淀。
取适量上清液进行实验测定。剩余上清液需立即分装，并保存在-80℃，避免反复冻融。
细胞裂解液
如果ELISA检测的蛋白质存在于细胞内，则需要先收集细胞，洗涤干净后再破损裂解，离心取上清。
对于悬浮细胞：4℃，2500 rpm离心5-10分钟，弃上清，沉淀为细胞。用预冷的PBS清洗细胞中杂质，在沉淀中加入0.1-1mL PBS，用移液枪轻轻吹打混匀。4℃，2500 rpm离心5-10分钟，收集细胞。
对于贴壁细胞：吸走培养基，用预冷的PBS清洗3次。然后用胰蛋白酶消化。4℃，2500 rpm离心5-10分钟，弃上清，沉淀为细胞。
细胞裂解操作：
加入中强度RIPA细胞裂解液（pH7.3），含有蛋白酶抑制剂，一般106个细胞加入150-250μL裂解液。裂解液不建议使用含NP-40、Triton X-100和高浓度DTT的组分。如果没有RIPA裂解液，可使用50mM Tris+0.9% NaCL+0.1% SDS,PH 7.3及适量蛋白酶抑制剂（如PMSF，工作浓度1 mmol/L）。也可选择冰上超声处理样品，功率150-300W，裂解1-2s，间歇20-30s，3-5个循环。
裂解或超声破碎完成后，4℃，10000rpm离心10min，上清移入新的EP管中，立即用于检测，或分装于-80℃冻存备用。
四、特殊样本的处理
1. 唾液
用无菌管收集未刺激的唾液2-5mL，4℃以4000 rpm的速度离心15分钟，除去任何颗粒或沉积物。取上清进行检测。其余上清可分装后保存于-80℃。
2. 痰液
选择痰液中较为粘稠部分称重，加2倍体积的0.1% DTT（二硫苏糖醇）溶解粘液，反复吹打，涡旋震荡15-30s。在加2倍于痰量的PBS缓冲液，振荡混匀15-20分钟。4℃，1500 rpm离心10分钟，吸取上清进行检测或保存。
3. 尿液
用无菌容器收集当天初次中段尿液。4℃，2000-3000 rpm离心20分钟，收集上清进行检测或-80℃保存。
4. 脑脊液
临床上人脑脊液的抽取采用腰椎穿刺法。实验动物如小鼠的脑脊液量较少，可以针头插入枕骨打孔抽取，当出现红色液体时说明脑脊液已经抽完。样品收集后，4℃，2000-3000 rpm离心20分钟，收集上清进行检测或-80℃保存。
胸腹水、关节积液可参考才方法。
5. 肺泡灌洗液
在纤维支气管镜下，按照常规方法进行支气管肺泡灌洗。每次注入无菌生理盐水20 mL，然后缓慢洗出。回收肺泡灌洗液，4℃，2000-3000 rpm离心10分钟，收集上清进行检测或-80℃保存。
6. 乳汁
收集样品，4℃，2000-3000 rpm离心15分钟，收取上清。重复离心3次，取上清进行检测或-80℃保存。
7. 粪便
将粪便用PBS洗3次，一般情况下每克粪便中加入9mL PBS缓冲液。超声破碎，功率150-300W，裂解1-2s，间歇20-30s，3-5个循环。然后5000×g离心10分钟，取上清检测，或分装冻存于-20℃或-80℃备用。
8. 精液
收集精液后需在室温或37℃条件下，用纤维蛋白溶解酶进行处理。之后将精液于4℃，4000 rpm离心10 分钟分离精浆，进行检测，或分装冻存于-20℃或-80℃备用。
9. 蛋黄
取新鲜蛋黄用超纯水稀释10倍。用盐酸调pH至5.0-5.2，4℃静置6小时，然后10000 rpm离心10分钟，收集上清。再调pH至7.2-7.4，进行检测，或分装冻存于-20℃或-80℃备用。
10. 土壤
取1g土壤，加入9mL的PBS（pH7.3），充分混匀。4℃，5000-36000 rpm离心5分钟，收取上清。
11. 植物样本
取新鲜植物组织在液氮中研磨。加入样品体积9倍的PBS缓冲液（pH7.3），于4℃，8000rpm，离心30分钟，取上清进行检测。