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北京义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)
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「ELISA问诊室」细胞样品该选上清还是裂解液呢？一文详解ELISA实验细胞样品处理全过程
30 人阅读发布时间：2026-03-25 13:55
ELISA是一种快速、灵敏、准确可靠的定性定量检测方法，可检测样本范围十分广泛，比如血液（血清、血浆）、组织匀浆或提取物、细胞培养上清、细胞裂解液、分泌物（唾液、乳汁）、排泄物（尿液、大便）等，甚至还可以检测土壤中的蛋白样品。
不同类型样本的处理方法也大相径庭。有些样本可直接进行测定，有些则需预处理。如何正确处理这些样本，是确保ELISA实验准确性的第一步，也是实验中经常遇到并需要认真对待的问题。
本文将分享细胞样品的处理方法，供大家参考。
主要用于检测细胞分泌性成份。无论是孔板培养还是培养皿、培养瓶，贴壁或悬浮细胞的密度需达到60-90%。
采集细胞培养上清500 μL到无菌试管中，4℃，2500 rpm离心5-10分钟，将澄清的细胞培养上清液移至新的离心管中，弃沉淀。
注意：细胞培养基中含有胎牛血清或其他生物体液中的杂蛋白，不建议用BCA法测定样本含量。
取适量上清液进行实验测定。剩余上清液需立即分装，并保存在-80℃，避免反复冻融。保存过程中有沉淀形成，需要在使用前再次离心。
用预冷的PBS清洗细胞中杂质，在沉淀中加入0.1-1mL PBS，用移液枪轻轻吹打混匀。4℃，2500 rpm离心5-10分钟，收集细胞。
还有一些情况，ELISA检测的蛋白质不是分泌蛋白，而是存在于细胞内蛋白，需要先收集细胞，洗涤干净后再破损随便，离心取上清。
对于贴壁细胞：吸走培养基，用预冷的PBS清洗3次。然后用胰蛋白酶消化。4℃，2500 rpm离心5-10分钟，弃上清，沉淀为细胞。
细胞裂解操作：
加入中强度RIPA细胞裂解液（pH7.3），含有蛋白酶抑制剂，一般106个细胞加入150-250μL裂解液。裂解液不建议使用含NP-40、Triton X-100和高浓度DTT的组分，会抑制抗原抗体反应。如果没有RIPA裂解液，可使用50mM Tris+0.9% NaCL+0.1% SDS,PH 7.3及适量蛋白酶抑制剂（如PMSF，工作浓度1 mmol/L）。如不超声裂解，可置于冰上裂解30min-1h，期间用移液器轻轻吹打。也可选择冰上超声处理样品，功率150-300W，裂解1-2s，间歇20-30s，3-5个循环。
裂解或超声破碎完成后，4℃，10000rpm离心10min，上清移入新的EP管中，立即用于检测，或分装于-80℃冻存备用。
注意事项：
· 建议在裂解液中加入适量的蛋白酶抑制剂，如PMSF，终浓度为1 mmol/L。
· 建议使用超声仪辅助破碎，超声波可有效打断DNA，不容易干扰试剂盒工作。
植物细胞的处理，建议使用超声破碎2s、间歇30s的方式，充分破碎细胞，使细胞破坏并释放细胞内成分。
对于条件培养细胞，需将细胞接种到完全生长培养基（含血清）的培养容器中进行培养，使细胞增殖达到预期生长密度。
留取20μL样品，用于蛋白质浓度测定。
有多重因素可能干扰样品浓度和质量，如细胞生长状态、细胞数量、培养基盐离子浓度、采样时间等。
因此，选择细胞培养上清还是细胞裂解液作为检测样品，主要看目的蛋白所在位置。如果目的蛋白是分泌型，可选择细胞培养上清。如果目的蛋白主要存在于细胞内，则建议选择细胞裂解液作为样本。部分胞内蛋白也可通过分泌或细胞凋亡后泄露至细胞培养上清。