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北京义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)
入驻年限：17 年
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北京
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技术服务、试剂、抗体、细胞库 / 细胞培养、ELISA 试剂盒
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生产厂商
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公司新闻/正文
「WB急救室」裂解液“三部曲”最后一篇：揭秘缓冲体系与蛋白酶抑制剂！
211 人阅读发布时间：2026-03-25 11:02
裂解液“三部曲”终于完稿！
本系列我们分别介绍了8种裂解液的配制、去污剂的种类及作用机制，以及接下来的裂解液缓冲体系和蛋白酶抑制剂组分。
「WB急救室」第17期，我们将重点介绍裂解液的缓冲体系和蛋白酶抑制剂组分，助你明明白白、清清楚楚提蛋白，WB实验不迷茫！
01 缓冲体系：裂解液的工作环境
pH缓冲液在裂解液中具有重要作用，防止蛋白质变性析出或水解，使用浓度一般为50mM左右。选择缓冲液时需要考虑蛋白等电点、缓冲范围等因素。实验室常用的有Tris-HCl、磷酸盐、HEPES-NaOH等，用得最多的还是Tris-HCl体系。
一般在缓冲液中会加入100-200mM的NaCl或KCl来模拟生理状况下的离子强度。盐离子浓度不宜过高，防止蛋白质因盐析而沉淀。盐离子浓度过高还会造成电泳泳道内电流过大，跑出“微笑”条带。
加入还原剂主要是防止蛋白质在提取过程中半胱氨酸残基被氧化。实验室常用的还原剂有β-巯基乙醇和DTT，其中β-巯基乙醇的使用浓度为5-20mM，DTT使用浓度一般为0.5-1.0mM。DTT稳定性较差，一般配成高浓度储存液，分装后于-20℃储存。
02 蛋白酶抑制剂：裂解液的“维稳因子”
一般组织或细胞内会含有大量的蛋白酶，样品一旦开始裂解就会被释放出来，蛋白降解、去磷酸化和变性也会随着样本裂解而开始。为了保证蛋白质量，提取全过程要保持低温（冰上或4℃），所使用的试剂和耗材要提前预冷。除此之外，在开始提取前还需向裂解液中加入合适的蛋白酶抑制剂，以维持样品蛋白的稳定。
常用的蛋白酶抑制剂如下表：
不同蛋白酶抑制剂在水溶液的半衰期是不同的，平时要注意储存条件。比如PMSF半衰期大约1小时，因此要在裂解细胞的时候临时加到蛋白裂解液里。
如果WB检测磷酸化蛋白，除了加入蛋白酶抑制剂之外，还需加入磷酸酶抑制剂。常见的磷酸酶抑制剂如下表：
好了，蛋白裂解液里的每种组分，我们都做了基本介绍。看到这，相信童鞋们多少都有点明白，不同的实验需要不同的裂解液。