「WB急救室」蛋白提取不用愁：8种裂解液选择全攻略（新手必看）

01 裂解液的“超级功效”

合适的裂解液需要具备哪些功能呢？

1）破坏细胞膜：利用去污剂破坏膜脂质双分子层，使细胞裂解，释放内部的蛋白质、核酸等。

2）溶解蛋白质：模拟生理状况下的离子强度，防止蛋白质因盐析出现沉淀。

3）稳定蛋白质：通过特定的缓冲液，提供稳定蛋白的pH值和盐离子环境。

4）防止蛋白质降解：添加蛋白酶或磷酸酶抑制剂，减少细胞裂解过程中的蛋白质降解或发生去磷酸化。

因此，功能齐全的裂解液需要包含去污剂、缓冲体系、盐离子和酶抑制剂。

通常选用近似生理的pH 7.4和20-50 mM的离子强度来作缓冲体系。Tris-HCl缓冲液因其缓冲能力强、不易形成不溶物、兼容性好，而成为裂解液的选择。使用100mM-200mM的NaCl来模拟生理状况下的离子强度。过高的离子浓度会导致泳道内局部电流过大，最终跑出笑脸状条带。

02 8种裂解液的“个性档案”

封闭液的选择，需要从靶蛋白特性、抗体特性、检测灵敏度及成本时效等维度进行考虑。比如高浓度的封闭液在降低背景的同时也会降低信号，因此低丰度蛋白最好使用低浓度的封闭液。如果抗体对BSA有交叉反应，选择脱脂奶粉可能更合适。如果实验要求背景信号极低，建议选择使用高纯度的BSA或鱼明胶。成本方面，脱脂奶粉较为经济。（在上一篇中，我们对6种封闭液进行了“大比武”，这里进行了归纳总结。对封闭液详情感兴趣的宝子们，可以查看“轻松搞定封闭液：6种类型大比武，助你WB实验封闭液选择不再愁”一文。）

1. RIPA裂解液（强、中、弱）

一种传统的用于裂解细胞或组织的快速裂解液，适用于总蛋白、膜蛋白、核蛋白的提取。在提取过程中裂解液对蛋白变性影响较小，简单易用。

RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解强度分为强、中、弱三类。

2. SDS裂解液

裂解效果强烈，可以轻松破坏细胞膜、核膜，使细胞内容物释放出来。常用于需要强烈破坏细胞结构提取蛋白的场景。在进行蛋白提取时，加入SDS裂解液后，建议再进行超声破碎，能让蛋白更加充分地释放出来。

常用配方：50mM Tris-HCl (pH 6.8-8.5)、1-2% SDS、100mM DTT，部分配方中会添加5-10%的甘油以稳定蛋白质结构，少数还有150 mM的NaCl以维持离子强度。蛋白酶抑制剂需另加。

3. Tris-Triton裂解液

利用非离子型去污剂Triton X-100破坏脂质双分子层，裂解细胞膜及细胞器膜，释放胞质蛋白，同时保留核膜完整性。裂解条件较为温和，能较好的保持蛋白质活性及结构。可用于提取细胞骨架蛋白。

常用配方：10 mM Tris-HCl (pH 7.4)、100 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM EDTA、1% Triton X-100、10% 甘油、0.1% SDS、0.5% 脱氧胆酸盐

4. NP-40裂解液

利用非离子型去污剂NP-40破坏脂质双分子层，适用于胞质蛋白提取，部分情况下需联合RIPA裂解液使用。不能用于核蛋白提取。

常用配方：50 mM Tris-HCl (pH 8.0)、150 mM NaCl、1% NP-40

5. ACK裂解液

即红细胞裂解液，主要效应组分为氯化铵。利用细胞内外的离子浓度差形成渗透压差，外部水分扩散至细胞内，使红细胞膨胀裂解。可用于组织蛋白提取过程中红细胞的去除。

常用配方：150mM NH4Cl、10mM KHCO、0.1mM Na2EDTA。

6. Urea裂解液

利用尿素的渗透压特性，使细胞膜破裂，释放出细胞内的物质。裂解效力高，能够有效地裂解多种类型的细胞，包括细菌、真菌和哺乳动物细胞。

常用配方：7-8M Urea、2M Thiourea、10 mM Tris-HCl (pH 8.0)、1% NP-40、0.5% Triton X-100、60-100 mM DTT等。

7. WB/IP裂解液

非变性条件下裂解细胞或组织样品的裂解液，可高效溶解蛋白质。裂解能力较为温和，可维持原有蛋白间的相互作用。

常用配方：20mM Tris-HCl (pH 7.5)、150mM NaCl、1% TritonX-100、EDTA等。

8. Tris-HCl裂解液

以Tris缓冲体系为核心的非变性裂解液，裂解能力缓和，能有效裂解细胞膜，不会破坏蛋白质结构。

常用配方：20-50 mM Tris-HCl (pH 7.4-7.6)、150mM NaCl、1% TritonX-100或NP-40、EDTA等。

总之提取不同亚细胞蛋白组分时需要不同的裂解液，且不同的裂解液对于不同位置的蛋白提取能力也不同，因此，我们需要根据蛋白质的定位选择合适的裂解液。

03 蛋白样品制备“急救包”

Tips 1：裂解液的pH值要合适，太高或太低都可能会引起蛋白质的变性、析出，一般选择Tris-HCl缓冲能力强的体系。

Tips 2：盐离子浓度保持一致，且尽量接近生理状态。盐离子浓度不一致可能会导致蛋白条带宽窄不一。盐离子浓度过高会造成蛋白盐析，在电泳过程中会导致蛋白往两边扩散，使得条带越来越宽，最后连在一起，或者出现笑脸条带。

Tips 3：提取的样本要尽可能新鲜，在裂解前几分钟加入相应的蛋白酶抑制剂。

Tips 4：提取全过程要保持低温操作（冰上），使用的试剂和耗材要提前预冷，提取后的样本保存过程中要避免多次反复冻融。

Tips 5：提取的蛋白样品如果出现透明胶状物，可能是基因组DNA等复合物，可加入核酸酶并超声处理，以降低样品粘稠度。

Tips 6：如果组织样本中血液含量较多，需要多次清洗，尽量把血液去除干净，或用红细胞裂解液处理后再进行蛋白提取。

Tips 7：对于易破碎软组织，如肝脏、脑等，可在剪碎后加入适量的裂解液，利用玻璃匀浆器进行充分研磨后冰上裂解10-30 min。

Tips 8：对于硬度大、韧性强或易降解样品，如软骨、皮肤、消化系统相关组织，可先用液氮研磨成细粉，再加入适量裂解液进行裂解。