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北京义翘神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)
入驻年限：17 年
- 联系人：
客服部
- 所在地区：
北京
- 业务范围：
技术服务、试剂、抗体、细胞库 / 细胞培养、ELISA 试剂盒
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「WB急救室」之条带弱、无信号，二抗选错=白做！5大关键点，科研人速存
22 人阅读发布时间：2026-03-24 16:12
WB，Western Blot
一个科研界的「神级」实验，科研人的「老朋友」
却总是不经意的给你带来「致命痛苦」
条带弱、无信号、背景高、抗体失效……
一旦失败，就是36小时的再等待
不说影响论文进度，身心的煎熬有谁懂？
现在，「WB急救室」专题正式上线！
我们将聚焦WB实验中的高频故障场景，以「急诊式」内容直击痛点。上一期我们解析了一抗选择及使用“雷区”。今天我们将继续聚焦条带弱、无信号“钉子户”，深挖二抗选择的关键信息。
二抗选择有四要素，分别是选择正确的种属来源和反应物种、选择正确的二抗特异性、选择正确的二抗形式、选择合适的偶联标记。
二抗的选择首要基于一抗，应与一抗的种属来源相对应，且需要来自于不同的物种。如一抗的宿主是小鼠，则选择抗小鼠的二抗，山羊抗小鼠或兔抗小鼠都可；如一抗的宿主是兔，则选择抗兔的二抗。请注意，我们这里讲的种属是抗体来源宿主的种属，即Host或Source的种属，而非反应种属（Species reactivity）。
特异性指二抗识别的不同一抗亚型或特殊区域。一般来说，多克隆抗体是IgG亚型，需选择相应的抗IgG二抗。单克隆抗体相对复杂一些，具有多种亚型，如一抗是小鼠IgM，则选择抗小鼠IgM的二抗。如果一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3），则所有抗小鼠IgG的二抗都可以。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。
IgG抗体适用于大多数实验。Fab片段只有一个结合位点，用来封闭内源性免疫球蛋白。胸腺、脾脏、血液等组织或造血细胞、淋巴细胞、B细胞等细胞内，含有较多的Fc受体，这时最好选择抗IgG Fc类特异性二抗，消除Fc与IgG的非特异性结合。
二抗上的偶联探针主要有酶标（HRP、AR等）、荧光基团（FITC、TR、PE）和生物素（Biotin）。IHC、WB和ELISA常选用酶标二抗，免疫荧光和流式细胞术常选用荧光基团的二抗。
二抗的种属来源一般差别不大，但一些特殊的实验会有要求。比如双标实验，如果其中的一个一抗来自山羊，另一个来自小鼠，则相应的二抗需要抗山羊和抗小鼠，此时二抗就需要选择山羊和小鼠以外的来源，比如驴来源的二抗。
关于WB条带弱、无信号这一“钉子户”，我们已经分享了一抗、二抗存在的问题及解决方案，接下来我们还会讨论样品浓度及其他操作过程中存在的问题，欢迎大家持续关注。如果您有哪些实验操作问题，欢迎在评论区留言，我们将会对问题进行整理后，交给专业的技术人员进行答疑！