ELISpot有哪些应用场景呢？疫苗、细胞免疫疗法研究中的“常客”

ELISpot技术是ELISA巧妙结合细胞培养，发展而来的一项高灵敏度的免疫检测技术。其灵敏度比ELISA高2-3个数量级，可在单细胞水平检测免疫活细胞的反应动态。因此具有高灵敏度、高通量、高可信度的优势。

ELISpot设计之初是用于检测B淋巴细胞分泌抗体的水平。B细胞分泌抗体一般量较大，容易检测，即时早期ELISpot灵敏度不高也能满足需求。随着技术进步，ELISpot检测灵敏度越来越高，因此更多地用于细胞因子检测。

ELISpot广泛用于免疫研究领域，如T/B细胞功能研究、自身免疫检测、疫苗研究、肿瘤免疫治疗开发、基因疗法免疫原性检测等。

1、免疫学基础研究

ELISpot通过检测不同细胞因子的表达情况，区分被激活的T细胞亚群，如Th1主要分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α，Th2主要分泌IL-4、IL-5和IL-13。过敏研究中的热点之一是用ELISpot测定Th2型细胞因子，因为过敏反应常由Th2偏向型免疫应答驱动，但分泌相关细胞因子的T细胞在外周血中频率极低，ELISA可能因灵敏度不够而检测不到，需要高灵敏度检测技术才能成功检测到。在样本量有限的研究中，如致敏人群或儿童群体样本，ELISpot能在细胞因子分泌瞬间将其捕获，避免细胞因子被降解、稀释等问题，使其成为过敏检测“不二之选”。

2、疫苗研发

多项指导原则中推荐用ELISpot检测疫苗的细胞免疫反应，如2020年国家药监局药审中心（CDE）发布的《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究》，中国食品药品检定研究院发布的《预防用DNA疫苗临床前研究技术指导原则》及《预防用以病毒为载体的活疫苗制剂的技术指导原则》。在国际上，同样认可ELISpot是检测和评价疫苗免疫水平的重要工具，比如在国际艾滋病疫苗行动计划中监测新型HIV疫苗的试验采用ELISpot技术。

在疫苗研发中常用ELISpot检测IFN-γ表达情况。IFN-γ在介导抗病毒免疫应答中发挥重要调节作用。机体在接种疫苗后，IFN-γ的表达水平直接反映辅助性T细胞的活化状态。ELISpot通过测量T细胞反应能力来定义疫苗的效果。通过检测细胞分泌IL-2、TNF-α、IL-4、IL-5等痕量细胞因子表达水平，可进一步分析免疫反应偏向性，深入理解疫苗引起的免疫反应过程。此外，在mRNA疫苗研发中，未经修饰的mRNA可能会被机体视为外源物质，引发免疫反应，利用ELISpot技术检测TNF-α炎症因子，对疫苗免疫原性和安全性进行评价。因此，ELISpot技术广泛用于评估感染性疫苗和肿瘤疫苗的临床及非临床阶段药效学研究。

3、细胞免疫治疗

ELISpot技术可用于CAR-T产品开发阶段检测T细胞免疫应答功能的测试，比如IFN-γ、IL-2、TNF-α等细胞因子分泌水平评估。还可从动物模型或患者体内分离出CAR-T细胞，并用靶癌细胞重新攻击来评估细胞因子的释放，为CAR-T临床治疗评估提供数据支撑。或者将CAR-T细胞与PBMC样品一起收集，通过ELISpot与靶细胞共培养评估CAR-T细胞的功能。还可用CAR多肽池或病毒载体多肽池刺激分离的患者PBMC细胞，评估CAR或载体引起的非必要免疫原性，对CAR-T细胞安全性进行评估。

4、其他研究领域

ELISpot技术还用于基因治疗、传染病诊断、自身免疫性疾病机制研究、药物筛选等等。

Kathryn团队优化了IFN-γ ELISpot方法，以监测腺病毒（AAV）基因疗法的细胞免疫反应。为验证方法性能，研究人员用源自AAV5衣壳蛋白和其编码的转基因产物：人凝血因子VIII（FVIII）的肽段，及阳性对照（如巨细胞病毒 65kDa 磷蛋白肽段）刺激人外周血单个核细胞（PBMCs），并用于一项AAV5-FVIII基因治疗临床试验。给药后仅2周，大多数受试者就出现了针对AAV5衣壳的细胞免疫反应，而针对转基因产物的反应仅少量被检测到。

Oxford Immunotec公司基于ELISpot原理的T-SPOT.TB结核病诊断试剂盒已获FDA批准，用以定量检测患者血液或体液样品中结核效应T细胞数，判断患者结核分枝杆菌感染状态。它可以代替传统的皮肤测试，同时大大提高了敏感性和特异性，并且不受卡介苗接种影响。

ELISpot技术也可用于自身免疫性疾病的诊断和机制研究中，如I型糖尿病、多发性硬化、重症肌无力、系统性红斑狼疮等，分析异常的免疫细胞激活和细胞因子分泌谱。

义翘神州ELISpot产品优势

1、即用型预包被：操作简单，节省一天实验时间

2、超高灵敏度：百万分之一阳性细胞检测率，比ELISA灵敏度高百倍

3、高通量：96孔板，每天可检测数百个样品

4、单细胞水平：检测单个细胞的活性，而非细胞群体

5、检测样本多样：PBMCs、肿瘤浸润淋巴细胞、脾细胞等以及冻存细胞

6、结果直观可信：一个斑点代表一个阳性细胞

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