CAR-T 细胞免疫疗法，近日来可谓是「喜报连连」。

在 2 月 28 日，Science Translational Medicine 上发表了 CAR-T 疗法在实体瘤（胶质母细胞瘤）方面的研究进展。接着在 3 月 5 日，Nature Biotechnology 上发表了改进的 CAR-T 疗法可以完全让小鼠的实体瘤消除。而在 3 月 13 日，我国的一家生物公司经过短短的 3 个月时间，就拿到了我国首个 CAR-T 疗法临床试验批件。在我国，为了实现 CAR-T 细胞疗法与国际「并跑」甚至「领跑」的目标，特意开通了「绿色通道」。据不完全统计，目前已有 15 家公司提出了 CAR-T 临床试验申请。
 
简单来说，CAR-T 细胞免疫疗法先从肿瘤患者的体内分离出 T 细胞，在体外对这些 T 细胞进行改造，利用特殊的生物技术，「安装」嵌合抗原受体（CAR）。筛选能够特异性识别肿瘤细胞的 T 细胞，并在体外进行增殖培养。当 T 细胞数量达到一定数值后，回输到患者的体内，让其发挥特异的抗癌治癌功能。
 
CAR-T 疗法的基本步骤可以参考下图：


第一步：T 细胞收集、分离、活化
 
T 细胞离开人体后需要合适的培养环境才能存活，因此，选择合适的培养基是开展 CAR-T 研究的开端。义翘神州提供的 SMM 293-TII 无血清培养基无动物源成分和抗生素，且内毒素含量低于 10 EU/ml，可用于细胞悬浮培养和瞬时转染。
 
T 细胞体外活化最常用的是 CD3 抗体和 CD28 抗体。CD3 单克隆抗体（OKT3）能够特异性识别 T 细胞表面的 CD3 分子，通过 T 细胞表面 TCR-CD3 复合物与抗原提呈细胞表面 MHC-II 类分子 - 抗原肽的结合，导致 T 细胞活化、增殖。激动型 CD28 抗体对天然 CD28 受体的伴随刺激可以进一步促进 T 细胞的活化。
 
第二步：筛选肿瘤相关靶点蛋白
 
肿瘤相关靶点可以说是 CAR-T 疗法的「灵魂」 所在。不同的肿瘤会造成不同的基因突变，表达的蛋白也会不同。经过科学家不懈的努力，不断有新的肿瘤相关靶点被发现。
 

肿瘤类型	部分相关靶点蛋白
实体瘤	CA9、CD274、CEACAM5、EGFR、EGFRvIII、EPCAM、EPHA2、ERBB2、FAP、FOLH1、FOLR1、GPC3、IL13RA2、KDR、L1CAM、MET、MSLN、Muc1、PDCD1、ROR1
血液肿瘤	CD5、CD19、CD22、CD33、CD38、IL1RAP、IL3RA、MS4A1、NCAM1、ROR1、SDC1、TNFRSF8、TNFRSF17、ULBP1、ULBP2

 
第三步：CAR-T 细胞基因转导
 
CAR-T 细胞基因转导中常用的有慢病毒载体、逆转录病毒载体、转座子和 mRNA 电穿孔技术。义翘神州可以提供多种属、全长测序的慢病毒载体。Sinofection^® 转染试剂转导效率高，可以用于多种细胞。
 
EGFP 蛋白在不同细胞的转染结果

 
第四步：CAR-T 细胞体外增殖培养
 
通过基因技术改造的 CAR-T 细胞需要在体外培养到一定的数量才能达到治疗要求，回输到患者体内。一般一个病人需要几十亿到上百亿个 CAR-T 细胞。为了保证 CAR-T 细胞的安全性，要求培养基无血清、无动物源、内毒素低，义翘神州拥有 GMP 灌装车间，可以生产制备满足条件的 SMM 293-TII 无血清培养基。
 
CAR-T 细胞的健康生长离不开相关细胞因子。细胞因子（CKs）是一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质（约 5～20 kDa），它们在细胞培养过程中发挥重要作用。如白细胞介素 - 2（IL-2）常被用于促进人体免疫细胞，特别是 T 细胞的激活和扩增。义翘神州拥有丰富的高品质 GMP 级细胞因子，如 IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、EGF、IFN-gamma、GM-CSF、TNF-α等，用于 CAR-T 细胞生成、生长过程。
 
第五步：CAR-T 细胞质量检测
 
CAR-T 细胞回输到患者体内前需经过严格的放行检测。CAR-T 细胞的质量检测主要包括生化检测、微生物检测和细胞学检测。生化检测主要用于 CAR-T 的鉴别和纯度检测；细胞学检测主要是细胞计数、活率检测、体外效价检测（ELISA 检测试剂盒）等；微生物检测主要进行总厌氧菌计数、酵母和霉菌检测等。CAR-T 细胞质量的优劣直接影响临床治疗效果和患者的健康，如不进行严格检测，甚至会危及患者的生命。
 
义翘神州提供从用于 CAR-T 细胞质量检测的 T 细胞流式抗体、细胞因子 ELISA 检测试剂盒和用于检测 CAR-T 免疫疗法功效的 Annexin V/7-AAD 凋亡检测试剂盒等一系列高品质科研试剂。
 
CAR-T 细胞免疫疗法凭借明确的治疗效果和临床优势，目前已成为免疫细胞治疗中的颠覆性技术，不仅受到国内外研究人员、资本市场的追捧，更是让广大肿瘤患者看到了希望。希望这一技术能够延续目前的良好发展势头，争取早日将病人从癌症的折磨中拯救出来。

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