选错流式抗体，你就输了

 

由于在流式细胞实验过程中，荧光抗体对单细胞悬液的标记效果直接影响实验的数据质量。因此，需要考虑各种影响流式抗体品质及检测效果的因素，例如抗体特异性、荧光素信号强弱、荧光素标记方式、同型对照等。
一、确定流式细胞仪的配置
流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的功能决定的，所以要根据需要同时检测指标的多少数量，确定所用流式细胞仪的型号以及了解有哪些激光器和滤光片等信息。
二、如何选择流式荧光素
首先要根据仪器选用荧光素，但需注意：每个通道只能选择1种荧光素；各个通道之间的荧光素可随意搭配。其次，搭配的荧光素之间发射光谱重叠要尽量小。
         
三、流式抗体使用注意事项
建议实验细胞的数量和抗体的比例要适当。细胞过量或抗体过量都可能使实验结果受影响，因此需要优化试验条件。注：不同的流式技术对抗体的需求量有较大差异，例如传统流式细胞术(采用鞘液流系统)需要1×10⁶个细胞为起始上样量，抗体用量为10 μl，而微流式细胞术则只需5×10⁵个细胞，抗体用量减少到5 μl。
直标的流式抗体应该4℃避光保存，不要冷冻。
尽量选择经实验验证的流式抗体，以保证实验结果。 北京义翘神州公司（Sino Biological Inc.）流式抗体系列通过严格的质控流程，并且具有高特异性和高性噪比等特点。

四、同型对照抗体的选择
1. 为什么要用同型对照？  
同型对照（Isotype Control）是指使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型对照是真正意思上的阴性对照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。在流式细胞仪上样前，染色方式如下：样本管：一抗＋样本； 同型对照管：同型对照＋样本。
2. 如何选择同型对照？
一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体， 例如使用北京义翘神州（Sino Biological Inc.）的FITC anti-human CD19 抗体，成份是Mouse IgG1。那么它的同型对照应该是FITC标记的Mouse IgG1，注意同型对照的成份跟它的名称是相同的。
3. 哪些客户需要使用同型对照？
a.对流式不是非常熟悉的客户。
b.做胞内流式客户，比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。
c.使用不常见的标志或者特异性不高的标志的客户，因为客户不熟悉不常见标志的表达情况，根据同型对照可以判断阳性细胞的位置。一些特异性不高的抗体，如多抗，非特异性结合非常多，使用同型对照可排除假阳性。
d.对流式非常熟悉又使用常用的表面标志的客户，一般可以不使用同型对照。