从靶点发现到机制验证，肿瘤免疫治疗研究为什么离不开高质量抗体？

肿瘤免疫治疗研究中，一个候选靶点从基因组学数据到药物开发，至少要回答四个问题：靶点蛋白真实表达水平？由哪些细胞表达？药物能否触达靶点？干预后是否发生抗肿瘤作用？解答这些问题需要抗体工具。

抗体可以把分子信息落实在蛋白、细胞和组织水平，用于识别靶蛋白、作用机制、区分细胞和研究功能变化。这类检测抗体主要用于流式细胞术、免疫组化、免疫荧光等免疫学实验。阻断型抗体、激动型抗体或细胞清除抗体直接用于靶点功能验证。总之，抗体贯穿靶点发现、成药性评估和机制验证的整个周期。

义翘神州提供覆盖多种肿瘤免疫相关靶点的抗体产品，包括免疫检查点、肿瘤抗原、细胞因子、免疫细胞标志物、信号通路相关分子等，满足免疫检测、机制探究、靶点验证与免疫治疗药物研发等多重应用需求。

天然产物是新药研发的重要来源，过去40年FDA批准的药物中有41.8%源于此或受其启发，特别是在肿瘤和传染病领域。但天然产物结构复杂，其作用机制解析与靶点鉴定是药物研发法瓶颈。澳门大学的研究团队开发了一种热蛋白质组图谱-热邻近共聚集（TPP-TPCA）整合策略，用于鉴定化合物的作用机制。

黎芦胺（VAM）既往报道具有降压、抗增殖活性，且在三阴性乳腺癌（TNBC）中表现出抗肿瘤作用，但其具体分子靶点与作用机制尚不明确。ATP6V1C1在多种肿瘤中表达上调。通过TPP-TPCA技术，发现藜芦胺直接结合ATP6V1C1，抑制V-ATP酶的催化活性并阻断溶酶体酸化，破坏肿瘤细胞存活所必需的自噬-溶酶体通路。

VAM直接结合ATP6V1C1并抑制V-ATP酶活性（抗体用于WB实验，源自文献：doi: 10.7150/ijbs.106843）

在靶点发现和作用机制研究中，研究人员需要通过抗体完成靶蛋白的验证。比如WB可确认蛋白是否表达及表达量，IHC和IF用于确定蛋白在肿瘤、间质及不同细胞亚群中的分布，流式细胞术可分析蛋白是否位于细胞表面并比较阳性细胞比例。

Bing Zhu等人在筛选胆管癌ADC治疗新靶点研究中，确定ICAM1为合适靶点。研究人员利用流式细胞术以6种人胆管癌（CCA）细胞系为样本，选择72种抗体筛选肿瘤相关表面抗原，其中ICAM1不仅在全部6种CCA细胞中高表达，并且在正常293T细胞中不表达。免疫荧光证实ICAM1定位于胆管癌细胞膜。对78例肿瘤组织样本进行IHC检测，约37.2%组织ICAM1阳性，癌旁正常胆管或肝脏组织几乎不表达。

仅仅肿瘤高表达还不足以成为ADC靶点，还需要抗原结合抗体后能高效内吞进入肿瘤细胞。研究人员通过共聚焦免疫荧光和流式细胞术进一步研究，结果发现PE标记的ICAM1抗体结合CCA细胞后，随时间快速内吞进入胞内。在240min时，HuCCT1细胞的内化接近60%，SK-ChA-1和QBC939均超过40%，说明ICAM1有效介导抗体内吞，具备ADC靶点的重要功能。

ICAM1抗体用于共聚焦免疫荧光和流式细胞术（源自文献：doi: 10.1038/s41698-023-00447-z）

抗体可作为药效学和机制研究工具，验证抗肿瘤药物能否有效结合并占据靶点，同时明确结合作用是否可以进一步阻断受体-配体或蛋白-蛋白互作。

Niu等人在开发靶向SIRPα的抗体ES004-B5研究中，通过一系列抗体依赖实验验证靶点结合、相互作用阻断及抗肿瘤机制，比如流式细胞术结合实验、ELISA竞争实验、FACS竞争实验等。研究结果显示，ES004-B5抗体可识别SIRPα不同亚型，亲和力达到纳摩尔级，可阻断CD47-SIRPα相互作用。ROA检测发现阻断可以抑制下游的SHP-1募集。巨噬细胞吞噬实验证实，ES004-B5可增强PD-L1、CD20、EGFR等抗体处理后肿瘤细胞的吞噬。在小鼠肿瘤模型中，ES004-B5与CLDN18.2、PD-L1抗体联合均增强肿瘤抑制作用。CD8α抗体的CD8⁺ T细胞耗竭实验和IFNγ抗体进行的阻断实验，证实CD8⁺ T细胞和IFNγ与抗肿瘤机制相关。

用于验证ES004-B5是阻断剂的抗体相关实验（源自文献：doi: 10.1093/abt/tbae022）

抗体已应用于肿瘤免疫疗法研究的各个环节，从早期探索到走向临床转化，贯穿药物研发全流程。高质量抗体应具有高特异性、高灵敏度和高批间一致性，经过WB、IHC、ELISA、FCM等免疫应用验证。比如用于IHC或IF的抗体需要有相关靶点的阳性和阴性验证结果，用于流式细胞术的抗体需要具有稳定的信噪比、荧光偶联表现等。

义翘神州提供的肿瘤免疫靶点相关抗体产品，经过WB、IHC、IF、FCM或ELISA等应用验证，可用于肿瘤免疫机制研究、靶点筛选和创新免疫疗法开发。