梳理Wnt-3a、EGF、Noggin和R-Spondins在类器官培养中的应用场景

WENR方案与Wnt、MAPK/ERK、BMP等信号通路相关，是维持干细胞自我更新和分化的关键。

WNT通路的激活、BMP通路的抑制、EGFR和FGFR的刺激，有利于维持基底细胞和肺泡Ⅱ型细胞的干性。因此WENR方案中的Wnt-3a、EGF、Noggin、R-spondin 1对气道类器官和肺泡类器官的培养十分重要。

但在肿瘤类器官培养过程中，细胞因子的使用需要有所调整。比如90%以上的结直肠癌中Wnt相关蛋白的表达量会上升，所以在构建这类类器官时，培养基中去除Wnt-3a、R-spondin 1等细胞因子，不会影响类器官的增值和扩增。研究发现，在肺癌类器官构建的培养基中是否添加Wnt-3a，不影响成功率。

在类器官的培养过程中要合理使用WENR方案。Wnt-3a需要与R-spondin共同使用，才能达到理想的效果。Wnt信号通路过度激活会导致类器官结构紊乱，Wnt-3a的浓度一般控制在50-100 ng/mL，可根据类器官种类进行优化和动态调整。R-spondin有4种亚型，需结合类器官的组织来源进行特异性选择。

Noggin也与Wnt-3a协同作用，比如在肝类器官中，两者联合使用是长期传代的需求。在肺类器官培养中，Noggin缺失会导致肺泡上皮细胞过早分化。而BMP信号的过度激活会导致类器官形成囊状结构，失去功能性隐窝结构。Noggin常用于胃、肠道、肝脏、肺、胰腺等类器官的长期培养。

高浓度EGF可能会诱导异常分化，一般使用浓度为50 ng/mL，并建议定期更换培养基。在肿瘤类器官（如肠癌）中，其浓度需根据癌细胞特性调整。EGF易被蛋白酶降解，建议使用无血清培养基。

常见问题排查表（仅供参考）

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