高通量细胞因子检测新选择：SwiftFluo® TR-FRET如何助力疫苗研发评价

近日，由华西医院研发的EBV mRNA疫苗正式在海南博鳌乐城投入临床应用，率先填补全球EBV阳性肿瘤mRNA精准治疗领域空白。

在肿瘤疫苗和mRNA等新型疫苗，以及常规疫苗的开发评价中，不应仅依赖抗体滴度作为免疫原性评估的指标，需同步检测IL6、TNF-α、IFN-γ、IL-2等细胞因子的表达水平，来有效反映T细胞免疫应答的激活状态，并结合特异性T细胞计数共同构成完整的细胞免疫评价体系。《带状疱疹疫苗临床试验技术指导原则》（CDE发布）就明确要求检测疫苗诱导的IFN-γ、IL-2、TNF-α等细胞因子水平。

当疫苗研发项目进入动物实验或临床样本检测阶段，样本量会迅速增加，筛选批次也会增加。因此，需要高通量、高稳定性、低人工成本的检测方法来进行高效验证。

TR-FRET细胞因子检测试剂盒，无需洗板，大幅减少人工操作时间，低背景，高信噪比，能够提高检测效率和批间一致性，适用于多样本、多批次的高通量检测需求场景。义翘神州成功推出SwiftFluo^® 系列TR-FRET试剂盒，涵盖IFN-γ、IL-6、IL-2、TNF-α等细胞因子。

ELISA和ELISpot是细胞因子检测中应用广泛、方法体系成熟的经典技术。ELISA利用酶联免疫吸附的原理，可用于血清、血浆或细胞培养上清中的细胞因子总浓度。ELISpot在酶联免疫吸附的原理上进行升级，可检测单个细胞的分泌情况，特别适合观察低频免疫细胞应答。

但是在高通量检测时，它们会存在一定的局限性。

ELISA流程成熟，需要多步孵育、洗板、显色等过程，人工操作环节较多。在多批次、大样本检测时，洗板误差、操作差异和时间成本就会凸显出来。

ELISpot对活细胞的培养和刺激依赖性较强，实验周期较长，对细胞状态、操作熟练度、读板分析这些要求更高，高通量检测难度大。

在疫苗和药物开发周期中，从I、II、III期临床试验到‌上市后监测，需要检测‌数千、甚至上万份样本，高通量、低误差、低人工的技术方法更适用。TR-FRET具有均相、免洗、快速优势。在大样本、多批次检测场景中，TR-FRET技术均相免洗，大幅减少人工操作时间，提高检测效率和批间一致性，降低整体研发周期与失败风险。

表一：细胞因子检测方法对比

TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）技术通过两个荧光标记分子在一定距离内发生能量转移来实现对目标分子的特异性检测。在检测体系中，两个荧光标记的分子分别是能量供体和能量受体。能量供体中的镧系元素（铕Eu³+、铽Tb³+等）是长寿命的毫秒级荧光，而样本中的干扰信号（自发荧光、散射光、杂蛋白）属于短寿命的纳秒级荧光。通过时间分辨测量技术，设置一个延迟时间，可有效的将目标信号和背景噪声区分开。

SwiftFluo^® TR-FRET细胞因子检测试剂盒基于双抗夹心原理开发，包含两株表位不同的特异性单抗，分别偶联Eu（能量供体）与LA（能量受体）。当样本中存在目标细胞因子时（如IL-6），两株抗体同时结合目标因子，使供体和受体靠近到合适的距离。

在外部光源激发下，供体与受体之间发生能量共振转移。检测特定波长（受体665 nm，供体620 nm）的信号比值，即可测定样本中的细胞因子含量。目标蛋白水平与信号比值呈正比。

SwiftFluo^® TR-FRET试剂盒具有高特异性、高重复性和高通量的特性，适合用于疫苗免疫应答评价、炎症因子检测、细胞培养上清分析，以及药物筛选中的多样本检测。

目前，义翘神州 SwiftFluo^® TR-FRET 细胞因子检测试剂盒覆盖TNF-α、IL-6、IL-2、IFN-γ等常用检测指标，提供100、1000、10000 Tests等多种灵活规格包装，可满足疫苗研发和免疫评价中的多种检测需求。与国际知名品牌竞品比对，检测范围宽，性能优异。

同时，义翘神州还提供配套耗材，包括96孔白色浅孔板（货号：SFP02）和高透压敏膜（货号：SFM01）。

SwiftFluo^® TR-FRET 人IL-6检测试剂盒 （货号：SFBM003）