好奇！IHC、ICC和IF如何简单区分？一文理顺免疫组化3大核心实验技术原理

IHC是英文字母Immunohistochemistry的简写，中文名为免疫组织化学。其利用抗原抗体的特异性结合及化学反应使显色剂显色，对组织切片中的蛋白质进行定位、定性或定量研究。IHC使组织维持在原始结构，适用于观察细胞间连接、组织微环境及病理改变。

IHC-P和IHC-Fr是两种不同的IHC技术，主要在于组织样本的样式。IHC-P为石蜡切片的免疫组织化学，Immunohistochemistry Paraffin。IHC-Fr为冷冻切片的免疫组织化学，Immunohistochemistry Frozen。如果是使用荧光信号进行检测，还可能会分为IF-P（Immunofluorescence-Paraffin石蜡切片的免疫荧光）和IF-Fr（Immunofluorescence-Frozen冰冻切片的免疫荧光）。

ICC的英文是Immunocytochemistry，中文名为免疫细胞化学，对分离的细胞样本（如培养细胞、脱落细胞、细胞爬片）进行蛋白质定位、定性或定量研究。目前几乎不再使用酶促显色了，以荧光显色为主，所以ICC/IF常一起使用，特指细胞免疫荧光技术。ICC检测技术中细胞样本制备过程不像组织样本那样需要复杂的环境和繁琐的操作，细胞形态更为均一，空间分辨率更高，适用于多种细胞学样本，如干玻片、乙醇固定玻片、直接涂片、细胞离心涂片、液基细胞学样本等。

IF的英文是Immunofluorescence，中文名为免疫荧光，不区分样本类型（组织或细胞），也不区分样本制备类型（石蜡切片或冰冻切片），区别在于检测信号是“光”而不是“颜色沉淀”。IF可进行多种荧光染色，进行多重标记，用于评估大分子的共定位。

可通过词根来区分IHC、ICC和IF。如Histo-表示组织，Cyto-表示细胞。Chemistry-指化学检测方法，Fluorescence-指被激发的荧光团检测。

这是区分IHC和ICC的关键。IHC是保持组织的原始结构，如肝脏组织、肿瘤组织，包括IHC-P和IHC-Fr，ICC是脱离组织微环境的单个细胞、细胞团或细胞簇，如培养皿中的Hela细胞，以及临床诊断中常见的胸腹水、痰液、尿液、宫颈刮片、细针穿刺吸取物等临床细胞样本。

IHC常使用酶（HRP/AP）催化底物产生有色沉淀（如棕褐色）进行显色检测，在普通光学显微镜下观察，结果能够长期保存。IF使用荧光染料（FITC、TRITC等）在荧光显微镜下观察结果，背景通常是黑的，灵敏度高，但容易淬灭。

根据样本类型可以将IHC分为石蜡切片免疫组化（IHC-P）和冰冻切片免疫组化（IHC-Fr）。石蜡切片操作复杂，但能更好的保持组织的形态结构，切片薄，可连续观察，某些显色产物（如DAB）可长期保存，在实验中更为常用。冰冻切片能更好保存抗原活性，但组织在冷冻过程中易产生冰晶，破坏超微结构，组织形态结构较差。IHC-P和IHC-Fr的区别如下表：

为了让您一目了然，我们整理了这张对照表。

无论是IHC、ICC还是IF，理清逻辑就能避免混淆，明确实验目的就能轻松选择。

IHC和ICC属于应用场景范畴，两者之间的差别在于样本类型。如果研究对象是肿瘤组织、器官切片等完整组织，需要保留组织结构和细胞间连接，或进行临床病理诊断，需要选择IHC。如果研究对象是细胞系、原代细胞等，需要判断细胞是否表达目的蛋白或分析单个细胞中目的蛋白的表达情况，可以选择ICC技术。

IF属于检测工具。无论样本是组织还是细胞，采用荧光素标记抗体进行检测时均属于IF。需要明确目的蛋白在细胞内的具体定位（细胞膜或细胞核），或者分析蛋白是否存在共定位作用，优先选择IF技术。

正确解读抗体应用说明书

不同抗体厂商对IHC、ICC、IF的定义存在差异，在实验设计前一定要仔细核对产品说明书。如义翘神州的抗体产品，会明确标注IHC-P和IHC-Fr，以区分石蜡切片和冰冻切片，但ICC和IF未做区分，标注为ICC/IF指细胞免疫荧光。Abcam采用类似的标注体系，但ICC会单独标注。