技术革新，克隆无忧：ClickWay整合酶引领无缝克隆新时代

在分子克隆领域，每一次技术革新都推动着生命科学研究的边界。如今，义翘神州基于经典的Gateway^®技术，成功攻克了传统酶产品稳定性不佳的行业难题，隆重推出ClickWay整合酶系列产品。我们以更高的性价比、卓越的稳定性与简化的操作流程，为您开启载体构建如“搭积木”般简单高效的新篇章。

 

01 告别传统瓶颈：为何选择整合酶技术？

 

分子克隆的核心在于体外载体构建。传统方法主要依赖“切割-重连”路径，包括限制性内切酶-连接酶法和同源重组法。这些技术虽经典，却常伴随诸多困扰：

 

· 流程繁琐：需设计含酶切位点的特异引物，经历酶切、片段回收、连接等多步操作。

· 效率与精度难兼得：易受酶切不完全、连接效率低、组装方向错误等问题影响。

· 通量限制：繁琐的操作，使得难以在高通量应用领域实现效率与准确兼顾。

· 隐性成本高：PCR及酶切连接可能引入突变，必须通过测序验证，增加时间和资金成本。

 

而以λ噬菌体整合酶为核心的重组酶技术，通过特异性识别序列（att位点）直接实现DNA片段的“无错”置换，从根本上规避了上述问题。由此发展出的Gateway^®技术，已成为高通量、模块化载体构建的金标准。

 

02 ClickWay核心技术优势：更稳、更快、更准

 

ClickWay整合酶不仅继承了Gateway^®技术的所有精髓，更在稳定性上实现了突破。

 

2.1“无错”克隆，结果可靠 —— 测序确认？可能不再需要！

 

传统方法中，切割与连接步骤分离是引入错配的根源。ClickWay使用的整合酶在结合特异性att位点后，于同一催化中心内同步完成切割与重连，实现了“无错”连接，极大降低了突变风险，节省了宝贵的测序验证成本。

 

整合酶反应（LR反应）示意图（源自义翘神州讲座课件）

 

2.2 高灵敏度，胜任挑战 —— 大分子量/复杂载体构建的福音

 

面对大分子量或低浓度载体构建时，传统方法效率骤降。ClickWay整合酶对att位点识别具有超高灵敏度，可催化极低浓度的片段发生高效重组，显著提升大载体或复杂载体（如用于合成生物学、植物转化的载体）的构建成功率。在分子建库领域，Gateway^®技术的库容量和基因丰度较传统SMART技术具有明显优势。

 

2.3 操作极简，一步到位 —— 本可游刃有余，何必匆匆忙忙

 

告别多步操作。使用ClickWay技术，仅需将酶与底物质粒混合，室温孵育1-4小时即可完成反应。在设计端，也仅需为标准att位点设计通用引物，无需为每个项目反复设计和验证特异性酶切位点引物，大幅提升效率。通过通用的一步LR反应，ClickWay系统可以将目标基因构建到不同的骨架载体上，获得具有不同标签模块、调控模块或其他功能模块的载体，实现对载体功能片段或重组蛋白策略的高效筛选。

 

与传统Gateway^®技术酶相比，ClickWay系统进行了全面的稳定性升级，解决了传统酶产品易失活的问题，让Gateway^®整合变得更加游刃有余。

 

ClickWay整合酶工作流程示意图（源自义翘神州讲座课件）

 

2.4 模块化“搭积木” —— 多片段拼搭快速锁定最优解

 

通过精心设计的BP反应（构建入门克隆）和LR反应（将目的基因转移至表达载体），ClickWay系统实现了模块化载体构建。尤其是高活性的LR酶，可支持多达五个片段的高效、有序一步组装，让构建CRISPR载体、多基因表达载体、表达/调控元件组合筛选和基因组规模的功能研究等复杂任务变得简单和轻松。

 

03 ClickWayvs.同源重组克隆：性能全面超越

特性	传统克隆	ClickWay系统
引物设计	一事一议，需要进行验证	可跳过（或在引物两端添加通用attB接头）
PCR依赖	必需，需要进行PCR产物电泳和回收	可跳过（直接使用attB-GOI片段）
酶切步骤	必需，需要进行酶切产物回收	无需
连接反应	外切酶切割+连接酶连接	重组酶直接催化
突变风险	中（PCR、重组错配）	无
载体转换	一事一议，需要单独设计实施	标准化操作
高通量适配	不适合	适配

04 黄金应用场景

 

ClickWay整合酶系统是以下场景的理想选择：

 

4.1文库构建

 

ClickWay整合酶已经成功应用于cDNA文库构建等工业领域，客户使用结果表明， ClickWay酶解决了传统Gateway®酶稳定性和货期问题，较传统SMART方法具有高库容量、长片段扩增和低偏好性的优势。

 

4.2重组蛋白表达策略筛选

 

纯化标签、信号肽、促融标签、调控因子等重组蛋白的高效表征策略筛选是一个费时费事的工作，高效的蛋白表达策略对于下游蛋白研究至关重要，对于一些难表达蛋白需要进行大量的策略筛选。ClickWay系统可以用一步标准反应同时构建不同的表达载体，而不需要繁琐的引物设计、PCR和基因回收操作。

义翘神州将多年重组蛋白开发成功经验与Gateway^®技术融合，成功开发了EcHiYi细菌表达载体库与重组蛋白表达服务，依托高效ClickWay整合酶系统，48小时完成从目标基因到百余种构建策略筛选确认试验，高效解决了包括多种核酸酶、蛋白酶和细胞因子在内的，来源于不同动物、植物或其他真核生物的难表达蛋白在大肠杆菌中高效高活性表达，部分产品已进入产业化。

 

4.3基因功能研究

 

组织定位、时间定位、敲除、过表达、互作研究、多基因敲除等基因功能研究往往需要不同的试验结果进行交叉验证，稳定高效的ClickWay系统可以提供“一步到位”的载体构建过程，避免繁琐的分子操作，显著提升研究效率。目前ClickWay系统作为多片段组装方法，在功能载体构建领域大量成功应用，显著提升了下游客户的研发效率。

 

4.4交叉学科或分子“小白”

 

对于不熟悉分子操作的老师和同学，分子构建学习与成功应用成本巨大。ClickWay系统简单易上手，降低分子试验门槛，对于交叉学科老师、同学或其他分子试验“小白”十分友好。

 

✦义翘神州ClickWay整合酶

 

义翘神州ClickWay整合酶系列，包括BP克隆试剂盒（货号：SBBP01）和LR克隆试剂盒（货号：SBLR01）。整合酶以卓越的稳定性（长期保存活性无显著损失）、革命性的简便性和突出的性价比，重新定义了高效分子克隆。它不仅是技术的继承，更是体验的飞跃，旨在让每一位科研工作者都能更轻松、更自信地驾驭载体构建，专注于科学发现本身。

 

注：Gateway^®是Thermo Fisher Scientific Inc的产品注册商标