免疫组织化学 IHC 实验的设计变量有哪些？

免疫组织化学 IHC 实验的设计变量有哪些？

免疫组织化学（IHC）是一种相对简单明确的试验方法，但是我们仍然要根据不同的实验对每次 IHC 实验中的多个变量进行优化。所以我们特地整理了一些需要考虑的因素和变量来确保实验结果的可重复性和可靠性。

变量	考虑的因素
1：抗原	①抗原的种类； ②表达水平； ③样品的类型（包括组织标本和细胞标本，前者包括石蜡切片和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片
2：抗原表位	①若已表位作图，主要考虑一下翻译后修饰
3：合适的对照实验	①空白对照（不加一抗的对照实验）； ②同型对照； ③吸附对照（包括组织标本和细胞标本，前者包括石蜡切片和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片）。 ④组织类型对照
4：样品制备	①石蜡固定切片； ②冰冻切片；
5：固定方法	①浸泡法 ②蒸汽法 ③注射、灌注法 ④微波固定法
6：固定剂	①醛类固定剂（比较常用，需要进行抗原修复） ②非醛类固定剂 ③丙酮及醇类固定剂
7：封闭	蛋白封闭（例如用血清或 BSA）防止非特异性结合造成的假阳性，必要时封闭内源酶干扰和生物素；还要考虑会不会受到 Fc 受体干扰。
8：抗原修复	①高压热修复法 ②微波热修复法 ③酶消化法
9：检测方法	直接法还是间接法（信号需不需要放大）
10：检测复合物	①ABC ②LSAB ③聚合物或微聚合物
11：一抗	①实验种属：Human，Mouse，Rat 等； ②样本抗原蛋白的结构性质； ③单抗与多抗的选择：这个需要结合试验的类型 WB/IHC/ICC/ELISA 等等。免疫组化（IHC）推荐使用兔单抗。
12：二抗	①物种（根据一抗选择的结果来选择二抗，比如一抗选择兔单抗，二抗就选择羊抗兔） ②标记（根据后续实验需要）
13：标记方法	①化学显色法 ②荧光法
14：标记物	①DAB 系统 ②AEC 系统 ③BDHC 系统 ④TMB 系统 ⑤BCIP/NBT 系统
15：成像与分析	①荧光显微镜或者标准显微镜 ②肉眼分析或者成像软件分析

这 15 个变量决定着免疫组化的成与败，也决定着免疫组化结果的优与汰。我们要在实验之前确定这些变量。在一些关键步骤上要严格的精选比如选择一抗、抗原修复等环节，这样做的好处同样体现在试验出现问题了，我们可以及时的对照和更正。我相信，一个美丽的免疫组化结果应该是离你越来越近的。