蛋白A/G/L琼脂糖纯化树脂使用攻略

一、基础知识概览
蛋白A/G/L是从不同细菌中分离出来的一系列蛋白，可以特异性的结合抗体（详见附录1），从而被用于抗体纯化。蛋白A/G/L作为亲和配基被偶联到琼脂糖基质上， 蛋白A琼脂糖（Protein  A  agarose），可以特异性的和样品中的抗体分子结合，而与其他杂蛋白不结合，具有极高的选择性，可用于多种抗体（单抗和多抗）的分离纯化。蛋白A/G/L的种属来源和结合特性存在差异（见表1）。
 

	Protein  A	Protein  G	Protein  L
分离自/菌属	金黄色葡萄球菌	C型或G型链球菌属	马格努斯消化链球菌
结合区域	Ig Fc区域	Ig Fc区域	通过轻链结合抗体

二、蛋白纯化流程简述

需注意：上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗杂缓冲液对血清样品或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。

三、解惑答疑
问题一：Protein  A与Protein  G，谁与IgG具有更好的结合能力呢？
答：话说，Protein  G要更胜一筹。与Protein  A相比，Protein  G与血清蛋白结合水平更低，纯度更高，配基脱落也相对更低。另外，重组蛋白G由于已经除去了与白蛋白及细胞表面结合位点，减少了交叉反应和非特异性结合。因此，它比Protein  A有更大的亲和力（详见附录1）。
问题二：3类蛋白姐妹花，谁的结合范围更广？
答：Protein  L结合更宽范围的抗体类型，涉及IgA、IgD、IgE、IgG、IgM等。尽管有很宽的结合范围，Protein  L不是一个通用的抗体结合蛋白，L蛋白结合仅限于那些含有κ轻链的抗体。Protein G能结合所有人和鼠的IgG抗体亚型，而Protein  A与IgG的结合强度很大程度上依赖于该抗体的种属和亚型（详见附录1）。
问题三：蛋白纯化过程中易出现哪些问题呢？
以蛋白A琼脂糖树脂（Protein A  Agarose Resin）纯化蛋白为例，小编总结了操作过程中的常见问题及相应解决办法（见表2）。

表2 蛋白A琼脂糖树脂纯化蛋白操作常见问题

问题	可能原因	建议解决办法
柱子流速较低(<0.5 mL/min)	缓冲液中存在气泡或样品中的颗粒堵塞柱子或胶孔	缓冲液脱气、过滤样品。注意避免柱子干燥
洗脱组分中没有目的蛋白	抗体被降解	使用其抗原做配体的介质
	样品中抗体浓度太低	适当提高洗脱pH
	样品与Protein A结合能力低	换用其它类型的琼脂糖树脂
回收率逐渐减低	上样量太多	适当减少上样量
	柱子太脏	清洗树脂

问题四：琼脂糖树脂蛋白纯化方法有哪些优点？
答：
    a. 可重复循环使用。例如，北京义翘神州科技有限公司（Sino Biological Inc.）的Protein L Agarose Beads / Resin，重复循环使用20次后仍无明显性能变化；              
    b. 可进行原位清洗（Clean In Place, CIP）；
    c. 结合和恢复能力稳定性较好。如，义翘神州公司（Sino Biological Inc.）的Protein G Agarose Beads / Resin，在使用7天后，恢复能力依然比较稳定。

附录1 蛋白A、G及L对不同物种Ig的结合能力总览